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[자연과학] 미생물experiment(실험) - Gram(그람) 염색

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작성일 24-05-06 19:27

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② Crystal violet으로 염색하고 세척하자 균이 있는 부분은 청남색을 띤다.

④ 에탄올을 떨어뜨리자 순식간에 색이 투명해지면서 탈색되었다.

③ 요오드를 떨어뜨리고 세척한 후 ②의 상태와 차이가 없다.
∞ 세균의 세포벽에 착색된 crystal violet이 탈색제에 의해 저항성을 나타내어 보라색을 띠면 양성균이라 하고, crystal violet이 탈색된 후 대조 염색제인 safranin으로 염색되어 빨간색을 띠는 것을 음성균이라 한다. 그렇지 않으면 글라스 표면에 흠집이 생겨 균을 觀察하기 힘

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[자연과학] 미생물experiment(실험) - Gram(그람) 염색
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실험과제/생물의학
설명

순서

다.

5. 고찰

① 도말할 때에 증류수는 균을 풀기 위해 사용하는 것인데, 이때 증류수의 양이 너무 많으면 나중에 건조시키기 어려우므로 딱 한 방울만을 떨어뜨리도록 한다.

① 첫 번째 표본- 빨간색으로 염색이 잘 되지 않아 균을 찾을 수 없었으며, 솔잎처럼 생긴 수많은 선들을 보았다.

③ 세 번째 표본- 붉은 색의 동글동글한 것들이 모여서 붙어있는 것을 볼 수 있었다. 또 균을 증류수에 풀 때는, 힘을 주지 말고 약하게 해야 한다. 양성균 세포벽에는 teichoic acid가 존재하여 탈색제로부터 보호 작용을 하여 crystal violet이 남아있게 된다 그러나 너무 오래 탈색하거나 old culture된 세균은 거의 Gram 음성균으로 나타나기 쉬우므로 특히 탈색에 주의하여야 한다.

⑤ Safranin으로 재염색, 세척을 거친 뒤에 슬라이드 글라스는 육안으로 플레이트를 보았을 때 가장자리 쪽에 보라색인 부분이 보이며, 가운데 균이 놓인 부분은 주로 빨간색을 띠고 있다 하지만 색이 진하지는 않고 투명하다.

② 두 번째 표본- 색이 잘 나타나지 않아 균을 볼 수 없었다.

② 백금이는 시료를 뭍이기 전에 불에 달구어 멸균한 뒤 공기에 식혀 사용하는데, 균 배지에 대보아 식은 것을 확인하고 도말한다. 식품 미생물 및 實驗(실험) - Gram 염색

1. 實驗(실험) 목적 및 원리

∞ 균을 염색하여 색깔로 Gram 양성균과 음성균을 구분한다. 백금이를 사용 후에는 안전을 위하여 멸균하여 보관한다.

2. 재료, 시약, 기구

Escherichia coli (gram 음성간균), Staphylococcus aureus (gram 양성구균), Crystal violet(1차 염색제), Gram iodine(착색제), 95% ethanol(탈색제), Safranin(2차 염색제), 슬라이드 글라스, 백금이, 멸균증류수, 알코올램프, 일회용장갑, 피펫, 초시계 등

3. 實驗(실험) 방법

① 도말- 슬라이드글라스에 멸균 증류수 한 방울을 떨어뜨리고 균(E.coli)을 백금이로 취해서 도말

② Air Dry- 약한 불꽃 위에서 표본을 좌우로 흔들면서 건조시킴

③ Fixing- 도말면을 위로 하여 약한 불꽃 중에서 3번 정도 서서히 통과

④ Straining- Crystal violet을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 보라색으로 염색

⑤ Washing- 도말면을 아래로 하여 약하게 물을 틀어 염색액이 묻어나오지 않을 때까지 세척한 뒤 물기를 제거

⑥ Coloring- Gram iodine을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 색을 착색시킴

⑦ Washing- 위와 동일한 방법으로 세척한 뒤 물기를 제거

⑧ Decolorizing- 95% ethanol을 떨어뜨리고 5~10초간 방치하여 탈색

⑨ Washing

⑩ Straining- Safranin을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 재염색

⑪ Washing- 30초를 넘기지 말 것

⑫…(투비컨티뉴드 )

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